اخبار سلامت مقالات پزشکی

اصول روش MTT

اصول روش MTT

اصول روش MTT

روش MTT  بر پایه اندازه گیری زنده مانی سلولها از طریق فعالیت متابولیکی است. محلول آبی زرد رنگ (MTT  (۳-۴ و ۵ دی متیل تیازول -۲ – ییل( – ۵،۲ دی فنیل تترازولیوم ) به صورت متابولیکی در سلول های زنده به فورمازان نامحلول آبی بنفش احیا می شود. تعداد سلول های زنده به شدت رنگ مشخص شده توسط اندازه گیری های نوری ، پس از حل شدن فورمازان در الکل ، بستگی دارد. همچنین شرایط استخراج باید سعی در شبیه سازی یا بزرگنمایی شرایط استفاده بالینی داشته باشد تا بتواند مخاطره بالقوه سم شناسی را بدون ایجاد تغییرات قابل توجه در آزمونه ، مانند فیوژن ، ذوب یا هرگونه تغییر ساختار شیمیایی تعیین کند مگر اینکه احتمال اینکه احتمال این تغییرات در کاربرد بالینی وجود داشته باشد.

در این آزمون ، سلول های فیبروپلاست L927 در محیط کشت کامل که شامل DMEM، سرم FBS و آنتی بیوتیک است . در پلیت کشت سلول ۹۶ خانه چاهکی به میزان ۱۰ هزار سلول در خانه کشت داده شد و به مدت ۲۴ ساعت در دمای ۲۴ ساعت در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد و Co2 5 درصد قرار گرفت تا یک لایه مناسب از سلول برای آزمون ایجاد شود.

عصاره نمونه مورد آزمون مطابق با شرایط استاندارد ISO 10993-12  در محیط کشت سلولی تهیه و به مدت ۲۴ ساعت در دمای ۳۷ درجه درجه سانتی گراد و Co2  ۵ درصد قرار داده شده در هر آزمون از مواد کنترل مثبت و منفی استفاده شده است.

استخراج در ظروف سترون، خنثی و بسته با استفاده از روش های سترون مطابق استاندارد ذکره شده انجام شده است. از آنجا که دمای استخراج بیشتر از ۱ +- ۳۷ درجه به مدت (۲۴+- ۲) ساعت ، انجام شد. حداقل سه تکرار برای آزمونه ها و کنترلها استفاده شده است.

پس از گذشت مدت زمان عصاره گیری ، محیط کشت روی سلول های کشت داده شده را برداشته وسلول ها با استفاده از عصاره ها با سه تکرار تیمار شدند. بعد از ۲۴ ساعت محیط کشت روی سلول ها را برداشته و به هر خانه ۵۰ میکرولیتر محلول MTT   با غلظت ۵ میلی گرم بر لیتر اضافه کرده و به مدت ۲ ساعت در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد و Co2 5 درصد قرار دادیم.

بعد از گذشت مدت زمان فوق ، محلول MTT را خارج و به هر چاهک ۱۰۰ میکرولیتر DMSO اضافه کردیم.

سپس جذب نمونه ها و کنترل را با استفاده از دستگاه آلایزاریدر در طول موج ۵۷۰ نانومتر خواندیم.​

فکر خود را اینجا بگذارید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

سوالی دارید؟ با ما صحبت کنید!
مکالمه را شروع کنید
سلام! برای چت در WhatsApp پرسنل پشتیبانی که میخواهید با او صحبت کنید را انتخاب کنید
ما معمولاً در چند دقیقه پاسخ می دهیم
برند:
ALL
Select the fields to be shown. Others will be hidden. Drag and drop to rearrange the order.
  • Image
  • SKU
  • Rating
  • Price
  • Stock
  • Availability
  • Add to cart
  • Description
  • Content
  • Weight
  • Dimensions
  • Additional information
  • Attributes
  • Custom attributes
  • Custom fields
Click outside to hide the compare bar
Compare
لیست علاقه مندی ها 0